慢病毒包装服务

维真生物采用的包装系统是2代包装系统，即三质粒系统，该系统包括1个包装质粒(psPAX2)、1 个包膜质粒(pMD2G)、1个目的基因质粒和1株包装细胞(293T cell)。下图是2代慢病毒包装系统的示意图：

维真生物可以提供从LV质粒构建至病毒包装的所有服务外包项目。而且，维真生物全套的LV载体和表达系统可用于体内和体外表达human/mouse/rat ORFs，lncRNA，circRNA，shRNAs和CRISPR/gRNA。下面是LV从头合成的流程：

维真生物采用蔗糖密度梯度超速离心法对LV病毒进行纯化。它利用不同颗粒之间存在的沉降系数差，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带。下图是LV病毒纯化的示意图：

维真生物的LV病毒采用孔稀释法进行标定。

孔稀释法是通过数荧光的方法测定慢病毒滴度，得到的结果为有感染能力的慢病毒颗粒数。下图是维真某慢病毒(3.20×108TU/mL)孔稀释法测滴度时的荧光图：

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1、什么情况下选用慢病毒？

慢病毒的宿主范围比较广，既能感染分裂细胞，也能感染非分裂的细胞，在体内外研究中均可选择慢病毒作为病毒载体。此外，慢病毒也是构建稳转株的理想病毒。

2、慢病毒载体可插入多大的 ORF 片段？

一般情况下，慢病毒载体可容纳6 kb插入片段。然而，插入的ORF基因大于3 kb时会大大降低病毒的包装效率，进而影响病毒滴度甚至基因表达。

3、用于慢病毒感染的细胞接种量是多少？

将状态良好的目的细胞接种到24孔板，细胞浓度一般为1×10⁵/mL细胞，接种细胞数量需要考虑到细胞活力因素、状态因素、生长快慢因素、分裂因素等，一般是保证病毒感染时细胞汇合率达到50%-70%为佳。

4、什么是 MOI ？

MOI （multiplicity of infection），即感染复数，指的是感染时病毒与细胞数量的比值。一般认为MOI是一个比值，没有单位。

5、慢病毒是否能够稳定表达基因？

是的。慢病毒能将外源基因整合到宿主基因组中，不会随着细胞分裂传代而丢失，因此能实现外源基因的长期稳定表达。

6、维真慢病毒的包装周期是多久？

如果客户提供构建好的慢病毒载体，那么包装时间一般为2周左右，若包含前期载体构建等的时间，时间大概在5周左右。

7、慢病毒感染细胞后，目的基因的表达什么时间达到峰值？

慢病毒感染目的细胞后，一般情况下，在72-96h目的基因的表达能达到峰值，但是对于一些特殊细胞、如增殖传代比较慢的细胞，蛋白表达达到峰值则需要更长的时间。

8、怎样提高慢病毒的感染效率？

细胞良好的生长状态和感染时适合的 MOI 值是达到高感染效率的保证。一般可以通过提高感染时的 MOI 值来提高病毒的感染效率，必要时可在感染时加入助感染试剂ADV-HR来提高慢病毒的感染效率。

9、慢病毒感染后，细胞状态很差，甚至出现死亡，为什么？

慢病毒会对细胞造成一定的毒性，不同细胞对毒性的耐受力不同。建议调整并降低感染时使用的MOI值，即可在细胞准备时增加铺板细胞的汇合率（可提高至 70%），调整感染时加入的病毒量。此外，还可选择在感染4小时后换液，用新鲜的完全培养液继续培养观察。

10、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒三种病毒有什么区别？如何选择？

对于转染困难的细胞，科研工作者通常会选择病毒来导入目的基因。目前，腺病毒、慢病毒和腺相关病毒是常用的病毒载体工具。那么如何选择适合您实验体系的病毒工具，请参考下面3种病毒工具的比较：