逆转录病毒包装服务

一、逆转录病毒介绍

逆转录病毒（Retrovirus），又称反转录病毒，是一类RNA病毒，需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA，新合成的cDNA插入宿主的核DNA中，随宿主DNA复制、转录、翻译达到扩增目的。逆转录病毒科可分为7个属：α逆转录病毒属（Alpharetrovirus）、

β逆转录病毒属（Betaretrovirus）、γ逆转录病毒属（Gammaretrovirus）、δ逆转录病毒属（Deltaretrovirus）、ε逆转录病毒属（Epsilonretrovirus）、慢病毒属（Lentivirus）和泡沫病毒属（Spumavirus）。

逆转录病毒结构

逆转录病毒是一种RNA病毒，其两端为长末端重复序列（LTR），病毒颗粒为二十面体对称结构、球形，有包膜，表面有刺突，大小约80-120nm，基本结构包括包膜蛋白、基质、衣壳蛋白、核衣壳蛋白，以及病毒复制所需的酶(包括逆转录酶、整合酶、蛋白酶)。

逆转录病毒结构图

逆转录病毒基因组

逆转录病毒的基因组为二倍体，含两个相同单链RNA（+ssRNA），是一种连续线性单链RNA，长度为7-12 kb。简单逆转录病毒的基因组包含三个主要的编码段和一个小的编码域，主要片段包含三个基因gag、pol和env： gag基因编码病毒衣壳、基质等结构蛋白的基因，pol基因编码逆转录酶(p66/p51)、蛋白水解酶和整合酶，env基因编码gpl20和gp41两种包膜糖蛋白；小编码域包含前基因pro，该基因编码病毒蛋白酶。

逆转录病毒基因组结构图

（Endogenous Retroviruses in the Genomics Era）

逆转录病毒感染细胞过程

逆转录病毒只能在宿主细胞内复制，主要包括以下过程:病毒吸附在细胞表面，病毒包膜蛋白与细胞表面受体结合，囊膜与细胞膜融合，病毒颗粒进到细胞内，基因组RNA逆转录为双链DNA，进入细胞核并整合到宿主染色质上，转录产生病毒RNA；病毒RNA从细胞核迁移到细胞质中，翻译产生病毒蛋白，经过自组装后，包裹病毒基因组RNA形成未成熟病毒颗粒，以出芽的方式释放到细胞外，经病毒蛋白酶剪切多蛋白，成为成熟的子代病毒颗粒。

逆转录病毒可以与多种细胞表面蛋白结合而进入细胞，其宿主细胞范围很广，主要由病毒颗粒表面的包被蛋白(env)决定。

逆转录病毒特点

1、逆转录病毒具有广泛的宿主范围，可以广泛感染多种细胞类型，且整合率高；

2、逆转录病毒能与宿主细胞DNA整合，可以介导外源基因稳定、长期表达；

3、逆转录病毒主要感染分裂期的细胞，适用于干细胞相关的研究。

二、逆转录病毒包装服务介绍

逆转录病毒载体系统通常指的是称为γ逆转录病毒，表达系统由逆转录表达载体、辅助载体（表达病毒包装需要的蛋白质）和包装细胞系组成，由于逆转录病毒载体能将单链RNA（ssRNA）基因组转换为dsDNA分子，可以高效的将外源基因稳定的整合到哺乳动物细胞基因组，目前已被广泛应用于基因转移载体系统。逆转录病毒通常指的是称为γ逆转录病毒，包括MMLV（莫洛尼氏鼠白血病逆转录病毒）和MSCV（鼠干细胞病毒）。其优势之一是载体基因组永久整合到宿主基因组中，可长期稳定地表达转基因。但是由于无法穿过核膜，只能在细胞分裂过程中通过不完整的核膜来感染细胞，因此只能感染分裂期的细胞。其缺点主要体现在一是载体容量较小，二是包装的病毒滴度较低。从病毒应用来看，MMLV可以高效的将外源基因稳定整合到宿主基因组的病毒载体，在IPSC制备中也比较受欢迎，MSCV则比较适合胚胎干细胞、胚胎癌细胞、造血干细胞等的转基因表达。

下图为逆转录病毒包装示意图：

维真生物现可提供从质粒构建到逆转录病毒包装的所有服务项目，并可根据您的实验需要进行定制。下图为MMLV载体的示意图：

服务流程

维真生物现可提供从质粒构建到逆转录病毒包装的所有服务项目，并可根据您的实验需要进行定制，详情请致电400-0772566或13012994257.