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论文标题：The Deubiquitinase USP28 Maintains the Expression of PPARγ and Its Inactivation Protects Mice from Diet-Induced MASH and Hepatocarcinoma
发表期刊：Molecular Therapy（IF 12.1）
合作客户：浙江大学医学院附属第一医院徐承富、虞朝辉团队、浙江大学医学院张普民团队
| 基因信息 | USP28：泛素特异性肽酶28 | PPARγ：过氧化物酶增殖物激活受体 |
|---|---|---|
| 实验动物 | 6-8周雄性C57BL/6小鼠 | Usp28 KO小鼠、Usp28 WT小鼠 |
| 病毒产品 | AAV-TBG-shUSP28、AAV-TBG-shNC | AAV-TBG-NC、AAV-TBG-PPARγ |
| 注射方式 | 尾静脉注射 | 尾静脉注射 |
| 病毒用量 | 1×1012 vg，100 μL/次 | 1×1012 vg，100 μL/次 |
代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）是代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MAFLD）的一种进行形式，可进展为肝硬化和癌症。目前MASH的发病机制仍然知之甚少。浙江大学医学院附属第一医院徐承富、虞朝辉团队联合浙江大学医学院张普民团队在Molecular Therapy（IF 12.1）上发表文章The Deubiquitinase USP28 Maintains the Expression of PPARγ and Its Inactivation Protects Mice from Diet-Induced MASH and Hepatocarcinoma，发现USP28的失活能降低PPARγ的表达，并显著改善饮食诱导的MAFLD表型，表明USP28是MAFLD的有效治疗靶点。
作者发现USP28的蛋白水平在小鼠MASH（代谢功能障碍相关脂肪性肝炎）模型中显著增加，此外MAFLD（代谢功能障碍相关的脂肪性肝病）患者样本中USP28水平升高，其表达水平与MAFLD活性评分（MAS）呈正相关，并在来自MASH患者的样本中观察到USP28水平进一步升高。这些发现表明USP28可能有助于MASH的发展。为了确定USP28是否在MASH中发挥作用，将USP28敲除小鼠以及野生型鼠置于诱导MASH的饮食条件下，发现与对照小鼠相比，喂食MCD饮食的USP28-/-小鼠在血清ALT/AST水平、肝脏TG水平和肝脏羟脯氨酸含量的增加被显著抑制，组织学染色实验表明USP28-/-小鼠中MASH表型比野生型对照组更少。由于USP28基因敲除小鼠对MCD诱导MASH的保护作用可能来自USP28缺陷的全身效应，作者使用AAV-TBG-shUSP28在肝细胞特异性敲低USP28，发现肝脏中USP28敲低也提供了对MASH的保护。机制研究发现，USP28调节饮食诱导MASH的PPAR信号通路。
为了确定USP28缺陷小鼠对饮食诱导的MASH发育的保护作用是否是由于PPARγ的下调，作者通过使用AAV在USP28缺陷小鼠的肝脏中表达PPARγ，并证实外源性PPARγ表达使MCD饮食诱导USP28-/-小鼠肝脏中的PPARγ达到与对照小鼠相当的水平。与对照小鼠相比，在PPARγ表达的USP28-/-小鼠中，血清ALT/AST水平、肝脏TG水平和肝脏羟脯氨酸含量增加，肝脏中有更多的单核细胞/巨噬细胞浸润，并恢复了肝脏中PPARγ靶基因的表达。这些结果表明，由USP28缺乏引起的对MCD饮食诱导MASH的保护作用很可能是由于PPARγ蛋白水平的下调，进一步研究发现USP28的药理学抑制能减轻饮食诱导的MASH。
WD-CCl4模型更能模拟人类MASH，作者在MASH的WD-CCl4模型中验证了USP28的功能。研究发现当喂食西方饮食时，USP28敲除小鼠的体重增加程度相较于对照减少，这表明USP28缺乏在WD-CCl4模型中具有保护性。此外WD-CCl4小鼠的肝脏中诱导大量肿瘤，并且这些肿瘤由肝细胞癌形成，但USP28基因敲除小鼠中形成的肿瘤比对照组更少，并且肿瘤更小。与先前来自MCD模型的结果一致，WD-CCl4模型数据同样证明USP28对于小鼠中饮食诱导的MASH是必需的，并且是肝细胞癌的肿瘤增强剂，进一步研究发现USP28抑制剂能减轻WD-CCl4诱导的MASH，并防止肿瘤形成。
本研究发现USP28是一种重要的去泛素化酶，在MAFLD的发展过程中调节PPARγ的表达。USP28的失活能降低PPARγ的表达，并显著改善饮食诱导的MAFLD表型。在WD-CCl4的MASH模型中，USP28的失活也可以预防肝癌的发展。这些结果表明USP28是MAFLD的有效治疗靶点。
本文使用病毒载体：AAV-TBG-shUSP28 腺相关病毒定制
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