敲除界的yyds——维真小鼠gRNA pool克隆库！

CRISPR/Cas9是一种新型的基因组编辑技术，具有简单、成本低和高效的特点，被广泛应用于多个物种的精确基因组编辑。在基因敲除实验中，由于gRNA所介导的敲除效率难以预估，因此，为了提高切割效率，通常会靶向同一基因设计并合成多条gRNA。

维真生物现已建立了针对小鼠13000余个基因的gRNA Pool克隆现货库，分别针对每个基因设计了5条gRNAs，pool在一起克隆至AAV载体中，大大增加目的基因的敲除效果。

小鼠gRNA pool克隆载体图

产品特色

①U6驱动gRNA，CAGmini驱动GFP，便于监测质粒转染效率；

②载体骨架为AAV，可直接进行AAV包装；

③非常适合与spCas9 AAV病毒或spCas9转基因动物联合应用；

④可出售整库，也可出售单一子库：分转录因子、蛋白激酶、磷酸酶、药物靶点、膜蛋白等。

效果展示

针对小鼠Pten基因，我们设计了5条gRNAs，分别构建了5个单gRNA的质粒和gRNAs mix质粒。将5个单gRNA的质粒和gRNAs mix质粒分别搭配spCas9质粒转染N2A细胞。转染后24h，用puromycin进行筛选。转染后72h，提取细胞总RNA，然后通过RT-PCR检测小鼠Pten基因的敲除效果。结果显示，gRNAs mix组相比单条gRNA组目的基因mRNA降低更显著（图1），通过克隆加测序分析了编辑位置处的插入、缺失和突变（图2）。

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